作者：郭瑞; 郭玉峰; 居军; 黄焕原; 魏振宏结核分枝杆菌酶联免疫斑点试验
摘要：目的原核表达结核分枝杆菌标准菌株PPE36-p27蛋白，并应用于结核特异性细胞免疫检测。方法以结核分枝杆菌H37RV基因组DNA为模板，采用PCR法扩增PPE36基因，纯化回收后插入至原核表达载体pEASY，将测序正确的重组质粒转入感受态EcoliBL21（DE3），诱导表达PPE36-p27蛋白，经SDS-PAGE鉴定及NI-NTA亲和层析柱纯化。将纯化后的PPE36-p27作为特异性刺激原，建立新型T细胞检测方法ELISPOT-IL-12技术。结果重组质粒pEASY-PPE36经双酶切及测序鉴定，构建正确。PPE36-p27蛋白的相对分子质量约30000，纯化后蛋白浓度为14.69μg／mL。重组蛋白PPE36-p27应用于ELISPOT-IL-12检测方法时，可刺激机体产生细胞因子IL-12，与包被的抗IL-12抗体产生特异性结合，可见明显斑点。结论PPE36-p27蛋白在原核表达系统成功表达，以其为刺激原建立了ELISPOT-IL-12检测技术，可应用于结核的早期诊断。
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