作者：王利锋; 袁芳; 何红秋; 陈锐复合干扰素定点诱变聚乙二醇修饰
摘要：目的将复合干扰素（consensus interferon,cIFN）76位点丙氨酸（Ala）突变为半胱氨酸（Cys）,以期获得一种高效和可供聚乙二醇马来酰亚胺（PEG-MAL）定点修饰的IFN突变体分子。方法采用同源序列对比、空间结构模拟并结合IFNα与受体结合的特点设计突变位点。通过基因工程方法获得cIFNm76工程菌,IPTG诱导表达,所得包涵体经变复性、DEAE阴离子及CM阳离子两步交换层析纯化后,采用SDS-PAGE和高效液相色谱法（HPLC）检测cIFNm76的纯度;细胞病变抑制法检测其体外抗病毒活性;REFLEXTMⅢ基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法（MALDI-TOFMS）测定其相对分子质量;SDS-PAGE分析cIFNm76与PEG-MAL的交联反应;并进行N-末端、C-末端序列测定及紫外光谱扫描。结果 cIFNm76以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%以上,纯度大于95%,比活性约为1.08×108IU/mg,N-末端、C-末端氨基酸序列与理论一致,相对分子质量经MALDI-TOF-MS测定为19 500,紫外特征吸收波长为280 nm,与PEG-MAL成功交联。结论成功获得一种高效和可供PEG-MAL定点修饰的cIFNm76,解决了现有PEG定点修饰技术存在的问题。
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