作者：袁静 潘小霞 滕玉梅 姬秋彦 文喻玲 陈元...轮状病毒属病毒结构蛋白质类vp6酶联免疫吸附测定
摘要：目的原核表达轮状病毒（Rotavirus,RV）结构蛋白VP6,并初步应用于以VP6为检测抗原检测RV血清抗体的ELISA方法,用于不同型RV免疫后抗体水平的检测。方法提取TB-Chen株RV基因组RNA,采用RT-PCR法扩增VP6基因,插入表达载体pETL中,构建重组表达质粒pET-VP6,转化E.coli BL21（DE3）,表达rVP6。表达的rVP6经纯化后,与TB-Chen株（G2P[4]型）、Wa株（G1P[8]型）和SA11株（G3P[2]型）RV分别免疫豚鼠,制备血清抗体,以SA11株血清抗体,经Western blot鉴定纯化的rVP6,以纯化的rVP6为检测抗原,采用ELISA法检测不同型RV免疫血清抗体。结果重组表达质粒pET-VP6经双酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的rVP6相对分子质量约为45 000,表达量占菌体总蛋白的34.7%;纯化的rVP6纯度达90%以上,蛋白浓度为8.304μg/μl,可与豚鼠抗RV SA11株血清抗体发生特异性反应;以纯化的rVP6为检测抗原,可检测TB-Chen、Wa、SA11株和抗rVP6的豚鼠免疫血清抗体。结论成功地在大肠杆菌中表达了rVP6,以具有共同组/亚组抗原特异性的rVP6作为检测抗原,可检测同一组/亚组内不同型的RV血清抗体,为研制以VP6为检测抗原检测RV感染的ELISA试剂盒奠定了基础。
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