作者：彭超 李岩松 何晶龙 郭德军免疫毒素类原核细胞基因表达细胞毒性
摘要：目的 在大肠杆菌中表达、纯化重组靶向毒素hIL6（T22）-PE38,并检测其细胞毒性。方法以PHis-hIL6（T22）-PE38质粒为模板,PCR扩增hIL6（T22）-PE38基因,插入表达载体pET-28a（＋）的NcoⅠ和XhoⅠ多克隆位点,构建重组表达质粒,分别转化至大肠杆菌BL21（DE3）、Rosettablue（DE3）和BL21（DE3）pLysS中,IPTG诱导表达,并对表达条件进行优化。表达产物经亲和层析纯化后,检测其细胞毒性。结果重组表达质粒pET-28a-hIL6（T22）-PE38经双酶切和测序证明构建正确。表达的重组毒素相对分子质量约56 000,在大肠杆菌Rosettablue（DE3）中表达量最高。最适诱导表达条件为：1 mmol/L IPTG 28℃诱导4 h。重组毒素能选择性地杀伤人骨髓瘤细胞U266和鼠骨髓瘤细胞SP2/0,体外对U266和SP2/0细胞的IC50分别为0.5～1.0和1.0～1.5μg/ml。结论重组靶向毒素hIL6（T22）-PE38在大肠杆菌中成功获得可溶性表达,纯化的蛋白可明显选择性杀伤U266和SP2/0细胞。
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