作者：朱希强; 袁勤生重组人稀释叠后定性定量分析蛋白纯化纯化效率包涵体蛋白蛋白浓度氧化还原基本条件金属离子尿素浓度复性效率蛋白溶液imac最佳条件酸浓度体外对比率亲和gsh温度肝素氨
摘要：目的确定重组人EC-SOD包涵体体外稀释复性和复性后蛋白纯化的适宜方法.方法通过对pH、温度、包涵体蛋白浓度、尿素和精氨酸浓度及氧化还原对比率的定性定量分析,研究重组人EC-SOD包涵体体外稀释复性的基本条件.采用金属离子亲和柱(IMAC)和肝素亲和柱(Heparin-sepharose)对复性蛋白进行纯化,比较纯化效率的差异.结果最佳复性条件为pH8.5,尿素浓度为1.5 mol/L,精氨酸浓度大于0.3 mol/L,GSH:GSSG=4:1;复性温度及包涵体蛋白终浓度越高,复性效率越低.IMAC和Heparin-sepharose亲和柱均可用来纯化复性蛋白溶液,但Heparin-sepharose纯化效率较高.结论确定了重组人EC-SOD包涵体体外稀释复性的最佳条件及复性后蛋白纯化的方法.
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