Au纳米颗粒HBV DNA基因探针的制备及其在目视化检测HBV DNA中的应用

作者：习东; 宁琴; 卢强华; 姚凯伦; 刘祖黎; 罗...金纳米颗粒基因探针乙肝病毒目视化

摘要：制备金（gold，Au）纳米颗粒乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（hepatitis B virus deoxynucleic acid，HBV DNA）基因探针，研究其在目视化检测HBV DNA中的应用。Au纳米颗粒通过金-硫（Au-S）共价键结合烷氢硫醇修饰的寡核苷酸，制备检测探针。用荧光标记法检测Au纳米颗粒表面寡核苷酸的覆盖率和与其互补的寡核苷酸的杂交效率。检测探针与固定在尼龙膜上的捕捉探针构成双探针，用斑点杂交法检测HBV DNA，加入银离子（Ag^＋）-对苯二酚液染色观察结果。制备的Au纳米颗粒粒径为（12±5）nm，分散良好，在520nm有最大吸收峰，经寡核苷酸修饰后，最大吸收峰改变为524nm。Au纳米颗粒表面寡核苷酸的最大覆盖率为（132±10）条，最大杂交效率为（22±3）％。在尼龙膜上用斑点杂交法可检出低至10fmol的合成靶DNA，可目视化检出乙肝患者血清中HBV DNA的PCR产物。Au纳米颗粒HBV DNA基因探针可用于目视化检测HBV DNA，此方法具有敏感性高、特异性好、简单、价廉的特点，可望在许多领域，尤其是在多基因检测芯片上有潜在的应用价值。

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