作者：张新安; 赵斌分子信标连接酶病毒检测
摘要：为更好地理解连接酶的接合机制,研究了2′-氟取代核苷酸(2′-fluorinated nucleotide, FN)对T7 DNA连接酶接合特性的影响。利用分子信标的荧光信号变化来检测连接酶接合活性。结果显示,在连接酶作用的分子信标缺口处的5′端和3′端分别进行F取代时,对T7 DNA连接酶的接合效果分别阻滞(48.7±6.7)%和(70.6±4.0)%。在取代同时发生在5′端和3′端时,接合效果被阻滞(76.6±1.3)%。动力学参数的回归显示,FN取代会导致连接反应最大速率(Vmax)降低,同时导致米氏常数Km增大,说明酶和底物之间的亲和力在取代后减小。缺口两端的碱基错配也对酶接合反应效果产生一定的阻滞效应。本研究的结果和结论使对氟取代后,T7 DNA连接酶的接合特性有了更进一步的认识,为更好地应用T7 DNA连接酶接合活性提供有力的实用依据。
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