香鱼主要组织相容性复合体MHCIIB的分子克隆及其在鳗弧菌感染下的功能鉴定3

作者：李长红; 丁斐斐; 余莉; 陈炯香鱼主要组织相容性复合体鳗弧菌基因表达

摘要：主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex classⅡ，MHCⅡ）在脊椎动物免疫反应中发挥重要作用。本研究从香鱼（Plecoglossus altivelis）单核／巨噬细胞（monocytes／macrophages，MO／Mφ）转录组中获得了MHCⅡ基因β链（PaMHCⅡB）cDNA序列。PaMHCⅡB由920个核苷酸组成，包含一个大的开放阅读框，编码251个氨基酸，预测分子质量为28．23kD。氨基酸序列分析表明，PaMHCⅡB具有MHC ⅡB的典型特征，主要包括信号肽、2个胞外区和1个保守的connecting peptide／transmembrane／cytoplasmic（CP／TM／CYT）结构域，与北极红点鲑（Salvelinus alpinus）MHCⅡB同源性最高，为65．04％；系统发育分析表明，PaMHCⅡB与北极红点鲑MHCⅡB进化相关性最高。实时荧光定量PCR（quantitative real-timePCR，qPCR）结果显示，PaMHCⅡBmRNA主要在香鱼鳃、肠和脾中表达；鳗弧菌感染（Vibrioanguillarum）后香鱼肝中PaMHCIIBmRNA在感染后12h（hourspostinfection，hpi）时上调显著，在24hpi达到峰值，为对照组的3．18倍，脾、头肾、肠和鳃中PaMHCⅡB mRNA均在4hpi时上调显著，分别在4、8、24和12hpi时达到峰值，分别为对照组的85．18、2．06、4．21和6．81倍（P〈0．05）。香鱼MO／Mφ经鳗弧茵感染后，PaMHCⅡB mRNA的表达水平在4hpi时上调显著，在12hpi时达到峰值，为对照组的3．35倍（P〈0．05）。原核表达了PaMHCⅡB胞外区并制备其抗体。Western印迹分析结果表明，香鱼MO／M（1）中PaMHCⅡB具有N糖基化修饰，且鳗弧茵感染后其蛋白表达水平在12hpi时显著增加，在24hpi时达到峰值，为对照组的3．19倍（P〈0．05）。抗体封闭PaMHCⅡB后，香鱼MO／Mφ吞噬活性被抑制，为对照组的0．28倍（P〈0．05），而且鳗弧茵诱导的4个细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10和TGF-β表达均受到抑制，均在8hpi时被抑制最明显，表达量分别为对照组的0．23、0．41、0．51和0�

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