依托泊苷影响HEK293细胞同源重组修复体系

作者：黄佩香; 陈利俊; 马丽; 李莉萍稳定转染同源重组修复单链退火修复依托泊苷

摘要：抗肿瘤药物疗效的研究多集中在肿瘤细胞,目前针对正常细胞的研究颇少,有必要建立能进行定量分析的同源重组定量修复体系。我们已建立的模型可以探讨肿瘤药物化疗后对HEK293细胞DSBs修复的继发性后果。通过构建含有带I-SceⅠ酶切位点的同源介导的重组修复底物（homologous direct recombination,HDR）,或单链退火修复（single strand annealing,SSA）底物的细胞株,定量检测依托泊苷（etoposide,VP-l6）对同源性重组修复（homologous recombination,HR）通路的影响。成功构建了可用于定量检测DNA双链断裂（double-strand break,DSBs）诱导的SSA和HDR修复的正常人HEK293细胞应用模型。细胞毒结果证实,与SSA/293对照组对比,VP-16给药组16μmol/L（0.475±0.029 vs 1.000±0.000,P〈0.001）细胞活力明显降低;与HDR/293对照组相比,VP-16给药组16μmol/L（0.458±0.188 vs 1.000±0.000,P〈0.05）细胞活力降低。此外,本研究证实,VP-16抑制SSA修复,VP-16给药组2μmol/L与SSA/293对照组相比（0.575%±0.177%vs 1.352%±0.195%,P〈0.05）,修复效率降低;VP-16抑制HDR修复,VP-16给药组1μmol/L与HDR/293对照组修复效率相比（0.305%±0.078%vs.0.635%±0.049%,P〈0.05）,修复效率降低。VP-16诱导DNA损伤的同时,抑制HDR修复和SSA修复,修复效率呈现剂量依赖性。本研究结果可为抗肿瘤药物的临床应用提供某些指导。

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