作者：张泓泰; 陈媛媛; 侯剑; 马涛; 毕利军错配修复动力学解链dna
摘要：E.coli解旋酶Ⅱ（UvrD）是一种在甲基定向错配修复（methyl-directed mismatchrepair,MMR）和核苷酸切除修复（nucleotide excisionrepair,NER）中起重要作用的3′→5′解旋酶.本研究对大肠杆菌的UvrD进行了重组表达和纯化,并检测其ATP酶比活性（87U/mg）.利用表面等离子共振（surface plasmon resonance,SPR）方法实时检测了UvrD与同源双链DNA分子（homoduplex DNA）和异源双链DNA分子（heteroduplex DNA）结合的动态过程以及镁离子对此过程的影响.结果显示,UvrD与DNA的平衡解离常数在10^-7mol/L水平.DNA分子中错配碱基的存在,在一定程度上影响了二者的结合,而镁离子不是两者结合的必要因素.本研究还利用原子力显微镜（atomic force microscopy,AFM）方法在单分子水平上观察到UvrD将双链DNA解链形成单链DNA的中间体.此研究得到的UvrD与DNA结合的动力学信息数据以及解螺旋中间体的单分子可视化,为进一步深入研究UvrD在修复过程中的作用机制奠定了基础.
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