重组白眉蝮蛇去整合素定点突变对其生物活性的影响

作者：陈洪岩; 崔秀云; 张春鹏; 王继红; 赵霆; ...去整合素定点突变血管生成作用血小板聚集白眉蝮蛇

摘要：RGD为存在于许多糖蛋白配体中的氨基酸序列,对整合素具有识别作用.此序列也发现于许多蛇毒去整合素分子中.采用基因克隆技术从大连产白眉蝮蛇的毒腺中克隆出的去整合素adinbitor是含73个氨基酸残基的去整合素,分子中含有12个半胱氨酸和RGD模体.实验证明,adinbitor作为去整合素的新成员,具有典型的抗ADP诱导的人血小板聚集作用和抗肿瘤血管新生作用.为了将adinbitor的这2种功能分开,采用PCR基因定点突变的方法,将其cDNA序列中RGD模体改变成KGD.重组adinbitor（KGD）在E.coli BL21得到表达,并通过His·Bind亲和层析予以纯化.实验发现,adinbitor对ADP诱导的人血小板聚集具有明显抑制作用,其IC50=85 nmol/L,明显优于adinbitor（RGD）（IC50=150 nmol/L）.然而,与adinbitor（KGD）相比,adinbitor（KGD）则丧失了对血管生成的抑制作用.结果说明,adinbitor（KGD）可作为专一的抗人血小板聚集药具有潜在的开发前景.

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