核盘菌5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶的酶学性质

作者：于寒颖; 杨谦; 李琳epsp合酶莽草酸途径稳态动力学核盘菌草甘膦

摘要：核盘菌5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶（EPSP合酶）是AROM多功能酶的活性之一.该酶催化莽草酸磷酸（S3P）和磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）产生5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸和无机磷酸的可逆反应,受除草剂草甘膦（N-（膦羧甲基）甘氨酸）抑制.纯化了核盘菌AROM蛋白并对EPSP合酶进行了酶学特征研究.结果显示,该酶反应的最适pH值为7.2,最适温度为30℃.热失活反应活化能是69.62 kJ/mol.底物S3P和PEP浓度分别高于1 mol/L和2 mmol/L时,对EPSP合酶反应产生抑制作用.用双底物反应恒态动力学Dalziel方程求得的Km（PEP）为140.98μmol/L,Km（S3P）为139.58μmol/L.酶动力学模型遵循顺序反应机制.草甘膦是该酶反应底物PEP的竞争性抑制剂（Ki为0.32μmol/L）和S3P的非竞争性抑制剂.正向反应受K＋激活.当[K＋]增加时,Km（PEP）随之降低,Km（S3P）不规律变化,而Ki（PEP）随[K＋]增加而提高.

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