通过生物素化标记分析细胞膜亚蛋白质组

作者：廖翔; 朱旭东; 党颖; 李涛; 周晓巍; 黄培...细胞膜蛋白质组双向电泳生物素化亲和纯化

摘要：细胞膜在许多基本生物学作用过程中扮演着重要角色，比如细胞．细胞相互作用、信号转导和物质运输．分析不同生理或病理状态细胞的膜蛋白的表达变化，有助于了解这些生物学过程以及发现新的诊断、治疗靶位．成功地进行膜蛋白分析最重要的是获得足够浓度与纯度的膜蛋白．这里报告一种分离高纯度膜蛋白的方法，主要包括三个步骤：（1）生物素化活细胞表面的膜蛋白，（2）链亲和素琼脂糖亲和吸附，（3）强烈的清洗条件去除非特异吸附的胞质蛋白．最后用化学方法洗脱生物素标记的膜蛋白进行双向电泳分离分析．用该方法制备了HeLa细胞的膜蛋白．免疫印迹结果表明，生物素标记的膜蛋白基本上都是低丰度蛋白．这样制备得到的膜蛋白双向电泳分离出2400多个蛋白质点，而且大多数点的亮度相近，分布得相对分散没有聚集成群．这种图谱非常便于比较分析找到差异蛋白．多次重复制备膜蛋白、电泳表明该方法的重复性和稳定性很好．

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