作者：张艳; 何凤田; 黎松; 李蓉芬; 钟小林; 高...hmgb1bbox表达纯化elisa生物活性
摘要：经RT-PCR从人新鲜扁桃体组织中扩增人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的B box(88～162残基)的cDNA,构建于载体pUC19,经测序后与GentBank中报道的已知序列完全一致,再构建于原核表达载体pQE-80L/DHFR中,表达并鉴定目的蛋白.经Ni2+亲和层析柱、多粘菌素B层析柱纯化获得高纯度的DHFR/HMGB1 B box蛋白,然后将此重组HMGB1 B box加入到人外周血单核细胞(PBMCs)中,37℃,5%CO2下,刺激PBMCs 6 h,用ELISA检测PBMCs释放TNF-α、IL-6的量,经检测后证明纯化后的重组HMGB1 B box能显著地刺激PBMCs释放致炎因子TNF-α、IL6.HMGB1 B box的表达及其生物活性的初步研究,为进一步研究HMGB1 B box的作用机制以及新型抗炎制剂的研发奠定基础.
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