实时荧光定量RT-PCR在小鼠及人G蛋白mRNA检测中的应用

作者：熊仁平; 周元国; 陈星云; 刘苹; 夏季; 陈...实时pcr定量taqman探针g蛋白rna

摘要：用自行设计的TaqMan双标探针和扩增引物建立检测鸟苷酸结合蛋白(G-protein)mRNA的实时荧光定量RT-PCR技术.用G蛋白纯品绘制定量标准曲线,实时荧光定量PCR仪检测ECV304细胞和小鼠G蛋白mRNA水平.10 μmol/L Gqα mRNA反义寡核苷酸(GqαODN)作用ECV304细胞24 h后,Gqα的mRNA表达显著下降(3.18×108±1.75×108拷贝下降到1.44×106±4.82×105拷贝),48h和72 h下降更明显;Gsα和Gi2α的mRNA表达变化不显著.10μmol/L Gsα mRNA反义寡核苷酸(Gsα ODN)作用ECV304细胞24 h后,Gsα的mRNA表达显著下降(2.97×108±2.68×10 7拷贝下降到4.16×106±2.00×106拷贝),48 h和72 h下降更明显;Gqα、Gi2α表达变化不显著.小白鼠油酸致伤后6 h,Gqα mRNA表达显著下降(1.16×108±8.73×106拷贝下降到3.30×106±1.68×106拷贝),24h下降更显著(9.32×107±1.47×10 7 拷贝下降到4.14×106±1.67×10 6拷贝);Gsα和Gi2α表达变化的趋势同Gqα mRNA.结果准确可靠,重现性好.说明建立的实时荧光定量RT-PCR方法成功地实现了对ECV304细胞和小白鼠肺组织G蛋白不同亚型不同丰度基因表达的检测.

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