小鼠Lrp5基因5′端调控区域的功能

作者：吕萍; 龚瑶琴; 李江夏; 周海斌; 陈丙玺ldl受体相关蛋白5小鼠lrp5基因调控序列荧光素酶分析

摘要：为研究小鼠低密度脂蛋白(LDL)受体相关蛋白5(LRP5)基因5'端调控序列的功能,PCR扩增小鼠Lrp5基因翻译起始位点上游3 041 bp(-2 909 bp～+132 bp)DNA序列.PCR产物定向克隆到pGL3-basic载体上,重组质粒命名为pGL3-2 909.以pGL3-2 909质粒为模板,以不同的引物扩增出不同长短的DN段,分别定向克隆到含小鼠Lrp5基因基本启动子并含有荧光素酶报道基因的pGL3-103载体上,构建了12种荧光素酶报告基因表达体系:pGL3-267,pGL3-513,pGL3-535,pGL3-560,pGL3-575,pGL3-623,pGL3-645,pGL3-719,pGL3-770,pGL3-1032,pGL3-1 330,pGL3-1 619.以pRL-TK为内参照质粒,瞬时转染COS-7细胞,48 h后收集细胞测定荧光素酶相对表达活性,pGL3-575(-2 909 bp～-2 334 bp)活性是pGL3-513(-2 909 bp～-2 396 bp)的20%,pGL3-535(-2 909 bp～-2 374 bp)的活性是pGL3-513的44%,pGL3-575的活性是pGL3-560(-2 909bp～-2 349 bp)的48%,均有显著性差异.结果表明,在-2 396 bp与-2 374 bp之间的22 bp区域内以及-2 349 bp与-2 334 bp之间的15 bp区域内存在负调控元件.软件分析表明,此区域含有IK2,LYF1及MZF1调控元件.

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