作者：金美芳; 丁向明; 仇灏; 吴士良; 周嘉梁; ...融合表达蛋白印迹蓖麻蛋白样结构域结构模拟
摘要：多肽:Ⅳ-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAc-T)是催化O-糖基化的起始酶,在O聚糖的形成中起着关键的作用.为更好地研究该家族酶的结构与功能,采用PCR技术从pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21,获得相应表达产物,用谷胱甘肽S-转移酶(GST)亲和层析柱进行纯化,并进行了Western印迹检测和初步的酶活测定.为进一步研究其功能还在结构研究上利用网络结构模拟SWISS-MODEL服务器对ppGalNAc-T2的蓖麻蛋白样结构域进行结构模拟.成功构建了原核表达载体pGEX-4T-1/T2,获得有效表达和纯化,并初步鉴定了其活性,同时预测了其可能的三维结构和活性位点.
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