作者：彭其胜; 张国立; 吴广谋; 岳玉环; 孟锐奇...可溶性表达纯化细胞毒性
摘要：以IL-10的功能短肽(35肽,即IL-10第23至57氨基酸残基)为导向部分与PE40(绿脓杆菌外毒素除去受体结合区后的剩余部分)融合分别置入pet-20b(+)和pet-28a(+)构建重组毒素IL-1023-57-PE40的两种表达质粒,其中置于pet-20b(+)的重组毒素在BL21(DE3)pLysS中以周质分泌可溶形式表达,置于pet-28a(+)的重组毒素在Rosettablue(DE3)中以高效胞质可溶形式表达;依次通过硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析、铜离子亲和层析纯化周质分泌成份,得90%重组毒素纯品;细胞活性实验表明,该重组毒素只对单核-巨噬细胞有杀伤作用;细胞ELISA显示,该重组毒素对单核-巨噬细胞的杀伤作用(IC50为13.9 pmol/L)符合绿脓杆菌外毒素的作用机理.
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