作者：陈菁; 傅蓉; 刘树滔; 何火聪; 饶平凡gfp的羧基端跨膜递送
摘要：对Tat蛋白转导区域(PTD-Tat)的C端融合蛋白的跨膜递送作用进行探讨.采用DNA重组技术将PTD-Tat融合在绿色荧光蛋白(GFP)的羧基(C)端,构建重组表达质粒pGEX-GFP-Tat,IPTG诱导其表达后,采用谷胱甘肽-Sepharose 4B(GS-4B)亲和层析,获得纯化的谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合的重组蛋白GST-GFP-Tat.该蛋白与HeLa细胞共培养,荧光显微镜观察其荧光强度随着蛋白浓度的增高而增强.流式细胞仪分析发现,在4.0 μmol/L蛋白浓度下,转导效率高达80.0%;而在GFP氨基(N)端含有PTD-Tat的融合蛋白GST-Tat-GFP的阳性对照组,转导效率只有32.9%.实验结果表明,C端融合的PTD-Tat同样具有对外源蛋白的跨膜递送作用.该结果可能为PTD-Tat在蛋白药物递送方面的有效应用提供理论依据.
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