RNAi引起的Paxillin和p130Cas下调抑制胃癌细胞失巢性生长

作者：李莹; 药立波; 刘新平; 王立峰; 韩月恒; ...rnai失巢凋亡paxillinp130cas胃癌细胞

摘要：P130Cas和paxillin分子是整合素家族下游重要的衔接分子.为了探索这两个分子在肿瘤细胞抗失巢凋亡中的作用,应用RNAi技术分别抑制抗失巢凋亡的胃癌细胞BGC823中paxillin和p130cas基因的表达,观察它们对细胞失巢性生长的影响.依据siRNA设计原则,分别设计针对p130cas和paxillin的两条序列;成功的构建了特异性封闭上述两分子的载体pWH1-P130cas和pWH1-pxaxillin.构建的载体瞬时转染贴壁培养和失巢培养的BGC823后,RT-PCR和Western印迹检测发现paxillin和p130Cas分子在mRNA及蛋白水平的表达量均明显降低;倒置显微镜下观察发现,贴壁培养的胃癌细胞发生皱缩、脱落;失巢培养的细胞聚集成团的现象受到明显抑制,细胞团比对照组小,且较松散;MTT实验结果表明,失巢培养的BGC823pWH1-paxillin组细胞存活率(32.19%±6.11%)和BGC823pWH1-p130cas组细胞存活率(28.52%±5.02%)与对照组相比显著下降(P＜0.01vscontrol);FCM实验结果发现与失巢培养的对照组相比,BGC823pWH1-paxillin和BGC823pWH1-p130cas组细胞G1期抬高,并出现了凋亡峰.运用RNAi技术分别抑制了BGC823细胞中paxillin和p130Cas分子的表达,初步证明paxillin和p130Cas是细胞存活的重要信号分子,在肿瘤细胞抗失巢凋亡过程中具有重要的作用.

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