P53与TRF1、TRF2的体外结合及P53结合功能区的分析

作者：李玲; 张波; 邹万忠; 郑杰; 刘俊平p53体外结合

摘要：通过分析端粒结合蛋白TRF1、TRF2与P53的体外结合,探讨P53-端粒途径调节细胞生命活动的分子机制.GST和4种人P53-GST融合蛋白经大肠杆菌表达、谷胱甘肽-SepharoseTM4B纯化后,进行SDS-PAGE和考马斯亮篮染色.人P53包括野生型(1～393)、C端缺失体P53 N5(2～293)、N端缺失体P53 2C(95～393)、单个氨基酸突变体P53 R175H(175 R→H).各纯化蛋白的分子量与预计的完全一致,且纯化率达90%以上.将纯化的GST和P53-GST融合蛋白与人乳腺癌细胞MCF-7细胞蛋白进行体外结合反应,Western印迹检测反应物中P53和TRF1、TRF2的结合.野生型P53和P53-R175H均能沉淀MCF-7中的TRF1、TRF2,且结合力相似,而单独的GST则无沉淀TRF1、TRF2的作用.与野生型P53和P53 R175H相比,P53 2C与TRF1、TRF2的结合力明显增加,P53 N5与TRF1、TRF2的结合力大大减弱.表明P53和TRF1、TRF2可以进行直接而特异的体外结合,且它们的结合为P53 C端(293～393)结构域依赖性.P53和TRF1、TRF2这种结构域依赖性的结合可能与端粒动态变化所诱导的细胞活动有关.

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