作者：王宝利; 戴芳; 梁晖; 张瑞; 吴亚锋; 郭刚...重叠延伸法骨保护素表达活性分析
摘要：骨保护素(OPG)成熟肽N端D1～D4结构域仅由2个外显子编码.以人基因组DNA作为模板,采用重叠延伸PCR得到N端D1～D4域编码序列,并在其上游引入2×His密码子序列,然后克隆入载体pQE-30进行表达,SDS-PAGE表明8×His融合蛋白主要以包涵体形式存在,可被抗OPG抗体识别.变性条件下通过Ni-NTA金属螯合亲和层析对表达产物进行纯化后再经梯度透析进行复性,采用破骨细胞样细胞(osteoclast-like cell,OLC)诱导分化实验来检测重组蛋白的生物活性,证实单核/巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和破骨细胞分化因子(ODF)可协同促进多核OLC的生成,但加入重组OPG片段后,OLC生成显著减少.
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