抗鳗弧菌独特型单克隆抗体dsFv的构建及其噬菌体表面呈现

作者：夏永娟; 黄宝成; 温伟红; 黄威权独特型单克隆抗体噬菌体表面呈现体表融合蛋白轻链可变区杂交瘤细胞株鳗弧菌疫苗使用细胞间隙

摘要：抗鳗弧菌独特型单克隆抗体1E10是能够模拟鳗弧菌的保护性表位，可以作为疫苗使用的一种单克隆抗体．利用基因工程抗体技术从抗鳗弧菌独特型单克隆抗体杂交瘤细胞株1E10中克隆出抗体的重链及轻链可变区基因(VG和VL)．通过定点突变技术将VH44和VL105突变为半胱氨酸并且连接到噬菌体表达载体pCANTAB5E中，突变后的VH和VL基因位于cpⅢ先导序列和cpⅢ基因之间，在LacZ启动子调控之下，以融合蛋白的形式被导入细胞间隙，依靠链间二硫键组装成二硫键稳定型Fv抗体(dsFv)．加入辅助噬菌体M13K07后，dsFv以融合蛋白的形式表达在噬菌体表面．ELISA测定显示：dsFv噬菌体能够与抗原结合并且这种结合呈噬菌体浓度依赖．结果表明：成功构建出了抗鳗弧菌独特型单克隆抗体dsFv基因并使其在噬菌体表面获得了正确呈现．该dsFv噬菌体有望成为新一代基因工程疫苗用于预防鱼类鳗弧菌感染．

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