p75NTR-Fc融合蛋白在毕赤酵母中的表达、鉴定和活性分析

作者：周素芳; 王欣; 陈虹; 黄秉仁神经生长因子低亲和力受体fc融合蛋白基因表达毕赤酵母

摘要：为在酵母细胞中表达出具有生物活性的p75NTR-Fc融合蛋白，采用PCR方法分别扩增α因子(α-factor)和p75NTR-Fc基因，经重叠PCR，获得α-factor-p75NTR-Fc基因．DNA序列分析该融合基因后，插入pAO815载体并构建串联多拷贝表达载体pA0815-3α-factor-p75NTR-Fc．重组质粒电转化酵母GS115细胞后摇瓶培养，1％甲醇诱导表达的融合蛋白经ProteinA亲和层析和Sephadex G-100纯化，Western印迹、N末端测序进行蛋白质鉴定，ELISA及细胞培养进行生物活性分析．SDS—PAGE分析显示，表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中，诱导第4d的表达量最高，占上清总蛋白60％以上，ProteinA纯化后有2条蛋白带，免疫印迹分析这2条蛋白带均能和抗D75及抗IgG抗体结合，N末端序列测定证实1条为完整p75NTR-Fc，1条为其蛋白酶降解带．ELISA等分析表明，p75NTR-Fc能与NGF结合，p75NTR-Fc能抑制NGF对PC12细胞的分化作用．

注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社