人核受体Nurr1基因的克隆和表达及产物纯化

作者：赖燕来; 孙朝晖; 李鹏; 谢佐平核受体相关因子1基因克隆原核表达亲和层析产物纯化

摘要：核受体相关因子1(nuclear receptor-related factor 1，Nurrl)是主要表达于中脑黑质及腹侧被盖区多巴胺能神经元的一种转录因子，属于核受体超家族成员，其功能性配体尚未被确认．研究表明，Nurrl对中脑多巴胺神经元的发育、存活以及成熟后功能的维持具有特殊重要意义．如能找到它的特异性配体，将为最终筛选出治疗帕金森病等中枢多巴胺失调性疾病的药物或化学合成先导物打下基础．为了获取Nurrl蛋白以标定其配体以及研究蛋白质间的相互作用，采用RT-PCR技术，从人胚中脑组织特异性扩增及克隆了人Nurrl cDNA，并获得一个在氨基端缺失350bp碱基的Nurrl突变体、将正常的Nurrl基因片段亚克隆至表达载体pET28a，分别在TNT^R偶联网织红细胞溶胞系统和大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达，均以可溶性形式存在，且产自于体外转录，翻译系统的真核表达Nurrl蛋白已标记上同位素^35S,Western印迹分析表明，所表达的重组目的蛋白具有特异的免疫反应性．经Ni-NTA亲和层析，得到了初步纯化的rhNurrl蛋白．

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