切割Fas mRNA核酶的构建及其体内外切割活性的鉴定

作者：张敏; 刘芳; 游泳; 何伟; 邹萍; 童允洁; ...核酶fas凋亡肿瘤免疫

摘要：白血病细胞表面可高表达FasL，诱导表达Fas的T细胞凋亡，从而降低其抗白血病的作用．以高表达Fas的小鼠淋巴瘤细胞系Yac-1作为模型，设计并合成了针对Fas mRNA 596位点的锤头状核酶基因，用T7／SP6体外转录系统检测了该核酶对Fas mRNA的体外切割效率，通过电穿孔转染法将其导入Yac-1细胞，通过RT-PCR、Western印迹法检测细胞上Fas的表达．细胞经抗Fas的抗体作用后，通过MTT法测细胞的增殖，annexin-V凋亡检测试剂盒测细胞凋亡．该核酶体外切割活性达60％，且能有效降低细胞表面Fas的表达；细胞经抗Fas的抗体作用后，转染核酶的细胞增殖活性较对照增高，而凋亡率明显降低．结果表明，构建的切割Fas mRNA核酶在体内外均具备良好的切割Fas mRNA的活性，使细胞免于Fas途径的凋亡，为研究抑制T细胞的凋亡从而增强其抗白血病效应提供实验基础．

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