G蛋白Rab3a协同神经生长抑制因子（GIF）抑制神经元的生长

作者：陈巧林; 康巧华; 任宏伟; 王宗元; 茹炳根rab3a神经生长抑制因子神经元转染抑制

摘要：为了研究G蛋白Rab3a与神经生长抑制因子(growth inhibitory factor，GIF，原称金属硫蛋白-3，MT-3)相互作用对神经元细胞生长的影响，以嗜铬细胞瘤株(pheochromocytoma)PCI2充当神经元模型．将hMT-3(human MT-3)和Rab3a基因分别克隆至真核表达载体pFlag-CMV-2和pSV-HA中，质粒共同转染PCI2细胞，观察转染后细胞的生长状态．以共转染pFlag-CMV-2-hMT-1和pSV-HA-Rab3a的细胞组作为对照，验证hMT-3与Rab3a相互作用对PCI2影响的特异性．结果发现，共转染pFlag-CMV-2-hMT-3和pSV-HA—Rab3a的PCI2细胞生长明显受到抑制，细胞生长抑制率与GIF在脑提取物存在F的神经元生长抑制作用接近，但转染两基因中的任何单个基因以及共转染pFlag-CMV-2-hMT-1和pSV-HA．Rab3a对PCI2细胞生长无影响．进一步构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rab3a和pGEX-4T-1-hMT-3，转化大肠杆菌BIS21，经谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析、凝血酶酶切和Sephacry1 S-100纯化，得到纯度95％以上的Rab3a和hMT-3蛋白．体外细胞生物学活性检测表明，表达的Rab3a蛋白与重组hMT-3蛋白共培养PC12，对细胞的生长产生了明显的特异性协同抑制作用，抑制曲线与GIF在脑提取物存在下的神经元生长抑制曲线极为相似．

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