内毒素结合肽的原核表达、纯化及生物学活性鉴定

作者：麻莉; 刘友生; 王晓东; 李永旺内毒素结合肽原核表达融合蛋白纯化活性鉴定

摘要：重组人内毒素结合肽(endotoxin binding peptide，EBP)融合蛋白在大肠杆菌中表达，分离和纯化后对其进行生物学活性观察．将构建好的Pinpoint Xa3-EBP生物素融合表达载体转化大肠杆菌DI-I5α，IPTG诱导表达菌株，亲和层析法纯化表达产物，因子Xa(factor Xa)切割分离内毒素结合肽，采用凝胶过滤和反相液相高效色谱法两步纯化，从相对分子质量、N端10个氨基酸的序列分析等方面进行鉴定；利用人单核细胞U937对重组内毒素结合肽进行了生物学活性的检测．结果发现，内毒素结合肽以包涵体形式存在，因子Xa酶切融合蛋白后得到3．5kD的内毒素结合肽，纯化后内毒素结合肽纯度达99％以上，N端10个氨基酸的分析结果与预期相符；初步证实内毒素结合肽具有较好的LPS结合活性，能够抑制LPS的作用．经原核表达及纯化复性，获得了具有较好生物学活性的内毒素结合肽，为进一步研究其功能奠定了良好的基础．

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