重组SARS病毒N蛋白可与SARS患者血清发生特异反应

作者：张士猛; 陈苏红; 张敏丽; 鲁丹丹; 张嵬; ...sars冠状病毒基因克隆基因表达核衣壳蛋白血清严重急性呼吸道综合症

摘要：N蛋白是SARS-CoV病毒基因组编码病毒核衣壳蛋白，它不同于现已知的任何蛋白质．对它的深入研究对揭示SARS-CoV的致病机理和疫苗及诊断试剂的研制有重要意义．灭活的病毒经逆转录后，用根据已知的病毒的基因组序列所设计的引物PCR扩增N蛋白基因．扩增出的基因经序列分析表明和已知的序列完全一致，共编码422个氨基酸残基．将N蛋白基因克隆入原核表达载体pET28a构建成表达质粒pET28a-N．表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，并用IPTG诱导后，获得了高表达N蛋白的重组菌株．目的蛋白经一步金属离子螯合层析纯化后获得了纯度超过90％的样品．Westem印迹及ELISA分析表明，SARS患者体内有特异性的针对N蛋白的抗体，并具有较高的特异性．这为临床上诊断SARS患者提供了新方法，并为SARS疫苗的研制提供了研究思路．

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