利用随机多肽文库研究ZO-1中PDZ3结构域的配体结合特点

作者：郭佳岩; 宋婀莉; 黄海明; 马素参; 高友鹤pdz3结构域蛋白质相互作用随机多肽文库酵母双杂交

摘要：建立一种研究PDZ结构域配体结合特点的简单方法，利用酵母双杂交技术从随机多肽文库中寻找所有可能与ZO-1中PDZ3结构域结合的C末端序列，从现有蛋白质数据库中检索所有具有该C末端蛋白，利用液体培养物β-半乳糖苷酶检测实验，比较文库中筛选的C末端序列和已知的PDZ3结构域结合配体——JAM的C末端(SFLV)与PDZ3结构域结合的强弱，共筛选到3个阳性克隆，其C末端序列分别为-LGWV、-LVWV和-DEWV，前2者属于第二类PDZ结构域，后者属于第三类，蛋白质数据库检索结果表明，有多个蛋白质具有-LGWV、-LVWV末端，没有检索到任何具有-DEWV末端的蛋白质，结合强度实验结果表明，它们与PDZ3结构域结合强度依次为-DEWV>-LGWV>-LVWV>-SFLV，说明筛选的3个C末端除了反映ZO-1中PDZ3结构域可能的潜在结合配体外，也有可能成为JAM蛋白阻断性试剂甚至药物的重要组成部分之一，利用随机多肽文库，可以尽可能寻找所有可能与PDZ结构域结合的C末端序列，大大提高了基因文库筛选的效率。

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