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HCV IRES介导萤火虫荧光素酶翻译的双顺反子载体的构建与在小鼠体内的表达

作者:詹林盛; 饶林; 彭剑淳; 王全立丙型肝炎病毒hepg2肝癌细胞内部核糖体进入位点荧光素酶

摘要:将HCV IRES插入双报告基因海肾荧光素酶(Rluc)基因和萤火虫荧光素酶(Fluc)基因之间,建立了“依赖帽子的扫描机制”翻译表达Rluc,HCV IRES调控Fluc翻译的双顺反子表达载体pCIRluc-HCV IRES-Fluc,通过酶切反应及转染HepG2细胞鉴定双荧光素酶瞬间表达活性等试验,证实获得了表达双荧光素酶的双顺反子载体,并应用水压转染法将双顺反子表达质粒导入小鼠体内,在小鼠肝脏检测到高水平表达的Rluc和Fluc,该研究成功构建一种HCV IRES介导萤火虫荧光素酶基因表达的双顺反子载体,并在HepG2细胞及小鼠体内进行了瞬时表达,为进一步建立稳定评价靶向HCV IRES药物作用的细胞及小动物模型研究奠定了基础。

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中国生物化学与分子生物学报

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