垂体腺苷酸环化酶激活肽基因合成表达和产物纯化与鉴定

作者：余榕捷; 洪岸; 张玲; 周天鸿; 戴云; 高媛垂体腺苷酸环化酶激活肽因子xa基因合成纯化与鉴定

摘要：为利用基因工程技术获得垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide，PACAP)，根据大肠杆菌的密码偏好性，设计并人工合成编码38个氨基酸的PACAP基因，克隆到表达载体pET-35b(+)，构建重组质粒pET-PACAP，转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，实现纤维素结合域(cellulose binding domain，CBD)与PACAP融合蛋白的表达，并在两者之间引入(凝血)因子Xa识别位点(Ile-Glu-Gly-Arg↓)，融合蛋白CBD-PACAP经纤维素亲和层析纯化后，因子Xa酶切释放PACAP，在因子Xa识别位点前引入7个氨基酸的柔性短肽(Gly-Thr-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly)明显提高了融合蛋白对因子Xa的敏感性，HPLC进一步纯化得到纯度大于95％PACAP多肽，所得的PACAP多肽的Western印迹鉴定为阳性；激光飞行质谱测定分子量结果与理论值相符，生物活性分析表明，所制备的PACAP具有促进胰腺癌细胞株SW1990胞内cAMP合成的活性。

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