食蟹猴疟原虫（Plasmodium cynomolgi）中一个真核翻译起始因子4A（eIF-4A）同源蛋白的cDNA克隆、表达和ATP酶活性测定

作者：宋平; 张竞男; 胡珈瑞; 李奎initiationfactor4arna解旋酶atp酶食蟹猴

摘要：真核翻译起始因子4A(eukaryotic initiation factor4A，eIF-4A)是DEAD盒蛋白家族的ATP依赖性的RNA解旋酶类中的一个原型成员，它在真核细胞的蛋白质合成的起始过程中起着关键性作用，通过PCR扩增和放射探针杂交相结合的方法筛选食蟹猴疟原虫(Plasmodium cynomolgi)的cDNA文库，克隆了一个eIF-4A同源蛋白的完整cDNA序列，命名为CH1F．CH1F全长1753bp，包含一个1197bp的完整阅读框，推测编码一个由398个氨基酸组成的蛋白，对CH1F的蛋白序列用BlastP进行搜索和分析，提示它应该是DEAD盒家族的一个eIF-4A同源蛋白；用DNAStar将其与许多典型的DEAD盒蛋白序列进行比对分析，结果显示：比起其它的DEAD盒蛋白，它与eIF-4A或eIF-4A的同源蛋白具有更高的同源性和更多序列上的相似结构域，将包含完整阅读框的片段亚克隆进表达载体pET-28a(+)，在大肠杆菌DH5α中表达，产生的融合蛋白大小在45kD左右，对该融合蛋白进行纯化、重新折叠和初步鉴定，ATP酶活性检测显示，该融合蛋白只有很低的ATP酶活性，而且它的ATP酶活性似乎不依赖于核酸底物，对这一检测结果给出3种可能的原因，这一检测结果与根据序列分析得到的推论——CH1F蛋白可能是一个eIF-4A并不矛盾。

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