内皮细胞抑制素酵母工程菌的高密度发酵及产物纯化和活性分析

作者：吴江雪; 符武钊; 张添元; 罗进贤; 吴群悦内皮细胞抑制素酵母工程菌发酵产物纯化毕赤酵母生物活性

摘要：用30升发酵罐研究了内皮细胞抑制素(EDN)酵母工程菌P．pastoris GS115(pPIC9K-EDN)的高密度发酵工艺，摸索出发酵培养基，pH，诱导时间等对菌体生长和基因表达的影响．根据所确定的最适条件进行发酵，通过补料和甲醇诱导48h后，工程菌GS115(pPIC9K—EDN)生物量的A600值达到250，分泌量为150mg／L,发酵液经Streamline SP，Sepharose SPFF离子交换柱和Sepharose-Heparin Hi Trap亲和柱纯化，产物纯度迭97％以上，回收率为60％．Western印迹结果表明，酵母工程菌GS115(pPIC9K-EDN)表达的重组人内皮细胞抑制素具有天然EDN的免疫原性．MTT法和抑癌实验结果显示：纯化产物能抑制人脐静脉内皮细胞的增殖并能抑制移植于小鼠的黑色素瘤的生长，其平均抑瘤率是94．2％．

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