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HER-2/neu胞外配体结合区2在大肠杆菌中可溶性表达及纯化

作者:徐明; 郭宁; 胡美茹; 王嘉宁; 施明; 沈倍...配体结合区原癌基因硫氧还蛋白大肠杆菌可溶性表达纯化

摘要:用PCR技术扩增HER-2/neu胞外配体结合区2(RLD2)cDNA,并将扩增的基因片段克隆于硫氧还蛋白(TrxA)原核表达载体中,获得TrxA—RLD2融合蛋白的可溶性表达.通过插入偶联翻译序列,实现TrxA与RLD2蛋白在大肠杆菌中的共表达.表达产物经免疫印记检测可被抗HER-2/neu特异性抗体识别.经离子交换层析和钴亲和层析纯化,RLD2蛋白的纯度达90%.用质谱法分析RLD2蛋白的分子量,与预期值相符.结果表明,利用TrxA表达体系在大肠杆菌中获得了HER-2/neu RLD2蛋白高效可溶性表达.

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中国生物化学与分子生物学报

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