作者：刘定燮; 周晓巍; 黄培堂sv40载体cos7细胞复制外源基因表达
摘要：为评价SV40载体／COS7稳定表达系统的可能应用价值，将含人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)编码区的SV40载体pctPA转染COS7细胞，并以G418选择培养28d，得到稳定的抗性细胞库．Southern印迹和溶圈法分别分析该细胞库在随后的细胞传代中细胞内附加体拷贝数及t-PA表达水平的变化．在经选择培养28d的COS7细胞库中，质粒pctPA以染色体外附加体的形式存在(300拷贝／细胞)，t-PA的表达水平为1．1μg／d(10^6细胞)、在随后3个月的动态观察中，随着细胞传代，该COS7细胞库tPA的表达水平虽逐渐递减，但在第1个月内可保持在1μg／d(10^6细胞)以上,基于SV40载体／COS7稳定表达系统无需筛选克隆，在稳定的抗性细胞库形成后的1个月内可能保持目的基因的高水平表达，因而较适合于需同时制备多种重组蛋白的实验。
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