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豌豆来源的毒性抗虫白蛋白cDNA在毕赤酵母中异源表达及抗虫毒性分析

作者:李弘剑; 张毅; 周天鸿杀虫剂豌豆白蛋白异源表达毕赤酵母象鼻虫

摘要:一种来源于豌豆的白蛋白(PA)对多种昆虫具有明显的毒性作用,为了进一步研究其抗虫机理,采用基因工程的方法富集蛋白质,将该白蛋白基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA,并导入毕赤酵母菌GS115中表达,通过PCR和Northern印迹法分析基因的整合及转录,对工程菌进行发酵,采用两步培养:第一步富集菌体,第二步甲醇诱导工程菌表达重组蛋白,并分泌到培养基中,经过超滤和HPLC分离,重组抗虫白蛋白得率约10mg/L,重组蛋白对象鼻虫敏感株表现出很强的毒力,半致死剂量LC50为4.7,与直接纯化于豌豆种子的白蛋白毒力一致,而对象鼻虫抗性株无明显毒力。

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中国生物化学与分子生物学报

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