MES23．5细胞酪氨酸羟化酶的种属来源及其重组酶的活性测定

作者：于泓; 李尧华; 冯秀丽; 吴燕川; 周虹; 陈...酪氨酸羟化酶种属来源重组酶活性

摘要：MES 23．5细胞作为研究神经变性疾病的工具，是一种杂交瘤性多巴胺能神经元细胞系，由大鼠胚胎中脑细胞与小鼠神经母细胞瘤-胶质瘤细胞系N18TG2杂交而成，其酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase，TH)的动物种属来源不清楚，应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法从MES 23．5细胞系中克隆了编码TH的cDNA；结构分析表明，其cDNA编码区由1497碱基构成，共编码498个氨基酸，与大鼠和小鼠TH的同源程度分别为93％和100％．该杂交瘤细胞系表达小鼠TH．将该cDNA亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1，经原核细胞表达、亲和层析得到了电泳纯的基因重组小鼠TH(recomlfinant mouse tyrosine hydroxylase，rmTH)，改良和建立了一种体外分析TH活性的新方法，活性分析证明，纯化的rmTH能催化L-酪氨酸发生加单氧反应生成L-3，4-二羟基苯丙氨酸(L-多巴)，rmTH的表观分子量为56kD；其酶促加单氧反应的最适pH值为7．0.乙二胺四乙酸能显著抑制此酶的活性，而亚铁离子能明显增强其活性。

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