作者：张宸; 陈韶华; 吴文倩; 周建芹谷胺酰胺转氨酶细胞色素c定点修饰
摘要：研究微生物谷氨酰胺转氨酶（mTG）催化细胞色素c（Cytc）的PEG定点修饰的可行性,并优化修饰条件,研究PEG修饰对Cytc性质的影响。将单甲氧基聚乙二醇氨（mPEG-NH2）与N-苄氧羰基-谷氨酰胺-甘氨酸（CBZ-QG）共价结合制备含谷氨酰胺残基的甲氧基聚乙二醇衍生物（N-苄氧羰基-谷氨酰胺-甘氨酰-单甲氧基聚乙二醇,CBZ-QG-mPEG）;mTG分别催化mPEG-NH2、CBZQG-mPEG（mTG）修饰Cytc,研究酶法定点修饰Cytc残基的可行性;改变酶的用量、温度、反应时间和pH等反应条件优化谷胺酰胺转氨酶催化修饰Cytc的条件。研究结果表明：（1）mPEG-NH2不能作为mTG的底物修饰Cytc,甲氧基聚乙二醇氨（mPEG-NH2）分子上引入谷氨酰胺残基后,在mTG的催化作用下了实现Cytc的PEG修饰,而且基于mTG的底物特异性实现了PEG定点修饰Cytc的赖氨酸（Lys）残基;（2）37℃温度下,pH 8.0的溶液中,1mg/ml的mTG催化修饰反应2h是最佳修饰反应条件;（3）化学法PEG修饰Cytc产物复杂,是多种多点修饰产物的混合物,酶法催化PEG修饰Cytc只产生单一产物;（4）与天然Cytc相比,修饰后Cytc的活力、稳定性都有所提高。提出的谷胺酰胺转胺酶催化修饰法解决了蛋白质Lys残基难以定点修饰的难题,拓展了mTG在蛋白质修饰方面的应用。
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