作者：裴丽丽; 黄芳; 李瑰婷; 庞书英; 任文华baff鲫鱼carassiusrace细胞活性
摘要：目的:获得鲫鱼B细胞活化因子(BAFF)基因的全长序列,并构建鲫鱼B细胞活化因子(BAFF)基因的可溶性表达体系,研究其蛋白表达产物对鲫鱼B淋巴细胞的作用。方法:通过RTPCR技术克隆鲫鱼BAFF(简称Ca BAFF)的全长c DNA序列,并利用RACE技术快速扩增c DNA末端,将Ca BAFF的可溶性片段(简称Cas BAFF)与表达载体sumo连接,并在大肠杆菌BL21中高效表达和纯化,Western bloting对产物Nus-His-Cas BAFF蛋白进行鉴定。激光扫描共聚焦显微镜分析表明,Nus-His-Cas BAFF蛋白可以与鲫鱼B淋巴细胞结合。体外,通过MTT检测纯化的NusHis-Cas BAFF蛋白能否促进鲫鱼B淋巴细胞的存活。结果:成功克隆鲫鱼BAFF基因,构建了重组表达载体,获得可溶性Nus-His-Cas BAFF蛋白。体外实验证明,可溶性Nus-His-Cas BAFF蛋白能够促进鲫鱼B淋巴细胞的存活。结论:可溶性Nus-His-Cas BAFF蛋白能够促进鲫鱼B淋巴细胞的存活/增值,为鲫鱼免疫系统的研究奠定了基础。
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