作者：权美玉; 郭强; 张坤水; 方瑞; 李翠琳; 杜...稳定细胞株nodal黑色素瘤基因沉默emt
摘要：目的：构建稳定过表达及稳定干扰Nodal的黑色素瘤细胞B16细胞株，并鉴定其EMT表型，用于研究Nodal诱导黑色素瘤EMT的现象及机理。方法：将过表达小鼠Nodal基因的质粒pL-tdTomato-mNodal，及携带有干扰Nodal基因序列的shRNA质粒pGFP-V-RS-Nodal，分别转染B16细胞。通过抗性筛选富集，阳性克I蚴b选及扩大培养，获得稳定转染细胞株B16／dT-mNodal及B16／sh-Nodal。通过实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测胞内Nodal的过表达及敲除情况和EMT标记物的表达情况。结果：两株细胞均构建成功，B16／dT-mNodal细胞株发出强烈红色荧光，胞内Nodal水平上调明显，并呈现间质细胞特性；B16／sh-Nodal细胞株发出强烈绿色荧光，胞内Nodal水平下调明显，并呈现上皮细胞特性。结论：成功构建稳定过表达Nodal及稳定干扰Nodal的B16细胞株，并构建Nodal影响B16细胞EMT过程的模型，为研究Nodal在黑色素瘤EMT过程中的作用提供了重要的实验工具。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
