作者：王晶; 吴陆生; 陈小佳; 董濠鋆; 沈巍; 张...pacap重组蛋白基因表达蛋白纯化
摘要：目的：通过构建PACAP38与Agrin的N端结构域（NtA）相连的重组基因的原核表达载体,获得重组NtA-PACAP蛋白,并验证其生物学活性,为未来的规模化制备奠定基础。方法：将PACAP38与层粘连蛋白的受体蛋白Agrin的N端通过连接肽相连,合成重组蛋白的基因片段,并在此基因片段末端连上6个组氨酸标签密码子,然后将此重组基因片段克隆至大肠杆菌表达载体pET-3c中,转化E.coli BL21（DE3）,获得重组工程菌并摸索发酵和纯化条件,IPTG诱导表达后收集菌体破碎离心,收集上清液,经阴离子交换层析和Ni-NTA树脂亲和层析两步纯化法获得目的蛋白;通过PC12细胞饥饿损伤后修复实验模型来检测NtA-PACAP38的生物学活性。结果： 成功表达并获得纯度90%以上的NtA-PACAP38蛋白,生物学活性实验证明NtA-PACAP38具有促饥饿损伤后的PC12细胞增殖能力。结论：获得的重组蛋白NtA-PACAP38具有生物学活性,表达系统和纯化工艺可以用于下一步的规模化制备。
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