作者：余南; 何蔼; 郑小英; 李卓雅; 郑焕钦; 詹...刚地弓形虫果糖1
摘要：目的：对编码刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）RH株果糖1，6-二磷酸醛缩酶基因进行克隆和序列分析，并构建原核栽体pETcFN融合表达该重组蛋白，以研究该分子在弓形虫速殖子入侵中的作用。方法：从刚地弓形虫RH株速殖子cDNA中扩增编码果糖1，6-二磷酸醛缩酶的基因，并克隆到T载体上，测序确认；通过PCGENE及在线工具对此编码序列进行分析；将该基因亚克隆到表达栽体pET30a（＋）上，构建质粒pETcFN；表达产物用Western blot进行进一步确认。结果：经PCR鉴定和质粒双酶切鉴定后测序，确认插入T栽体的序列为所需的目的序列。根据序列分析，推断蛋白的预计分子量为39．2kDa，等电点为7．75；BLAST分析，发现同源性52％以上的序列32条；模序分析发现其分别在223～233、21～147及15～363位置隐含有与PS00158（PmfileScan）、PD001128（BlastProDom）及PF00274（HMMPfam）相似的模序，这些序列分子功能均为果糖二磷酸醛缩酶活性。该编码片段亚克隆到栽体上成功构建融合表达质粒pETcFN，转化到大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达，得到分子量为43kDa的融合蛋白。Western blot的结果与预测相符。
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