作者：郭兆奎; 杨谦; 姚泉洪; 万秀清; 颜培强atkup1基因转基因烟草
摘要：提取拟南芥幼根总RNA,进行RT-PCR逆转录,产物测序,将其构建到含Km(带内含子)筛选标记的植物双元表达载体上,根癌农杆菌介导法将AtKup1基因导入烟草,对转化子进行PCR扩增、GUS染色、Southern杂交和AtKup1基因mRNA荧光定量PCR分析,并进行烟叶内在成分化验分析.PCR获得2100bp左右扩增产物,测序结果证实扩增产物序列与拟南芥AtKup1基因(Genbank No:AF029876)一致;得到GUS染色阳性的AtKup1基因转化烟草材料29株.经PCR扩增、分子杂交检测证实AtKup1基因已整合到转基因烟草的基因组,荧光定量PCR分析可以在幼根中检测到AtKup1基因的mRNA转录.烟叶含钾量化验结果表明导入的AtKup1基因在转化材料中成功表达,使烟叶含钾量提高约45%.
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