作者：李学仁; 曹瑞兵; 李斐; 魏建超; 陈溥言毕赤酵母分泌表达抗病毒活性生物活性测定干扰素奶牛pastoris
摘要：提取经新城疫病毒诱导培养的奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α干扰素成熟蛋白基因,然后将特异性片段连接到pMD18-T载体,测序结果表明,扩增片段为牛α干扰素成熟蛋白序列,与Genebank上发表的α1干扰素序列同源性为98%.然后将特异性片段连接到含分泌信号肽序列的Pichia pastoris表达载体pPICZαA上,将重组质粒经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33.转化子经PCR分析鉴定后利用甘油增菌和甲醇诱导,实现了BoIFN-α在毕赤酵母系统中的分泌表达.SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为23kDa,比其推导结果(20kDa)略大,推测可能是因为表达产物发生了一定程度的糖基化.细胞病变抑制法结果表明,重组牛IFN-α具有较高的干扰素活性,约为4.1×105U/ml,经微量蛋白测量仪测得,其表达量约为80μg/ml,比活为5.1×106U/mg.
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