作者：任书荣; 高美华人cd59基因定点突变cho细胞真核表达真核表达体系cd59突变基因分子量构建中国仓鼠卵巢细胞
摘要：构建突变人CD59分子(HMCD59)真核表达体系,探讨HMCD59糖基化前后抗补体活性的变化.采用重组PCR定点诱变技术在CD59易于糖基化的位点构建CD59突变基因,克隆入真核表达质粒pALTER-MAX.利用阳离子脂质体将重组质粒和pcDNA3共转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO).G418压力筛选稳定转染细胞克隆,检测筛选HMCD59蛋白高表达株.免疫印迹技术(Western blot)检测出HMCD59蛋白分子量约为20kDa.2,7-二羧乙基-5,6羧基荧光素(BCECF)释放实验初步证实HMCD59具有抗补体活性,糖基化后抗补体活性明显降低,为进一步研究糖尿病血管增殖症的发生机制提供了线索.
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