作者：辛艳丽; 贾玉艳; 王恒梁; 邓继先细菌人工染色体red重组系统flpsouthern同源重组bac克隆鼠同源序列
摘要：采用Red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1 BAC进行快速改构.首先通过PCR方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码Red重组酶质粒的RPCI23-440C1 BAC菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过同源重组片段两端与RPCI23-440C1中β-酪蛋白同源的序列在菌体内与β-酪蛋白基因发生同源重组,将其置换.最后利用Zeocin抗性基因两侧的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将抗性基因剔除.经Southern blot和序列分析鉴定表明,获得了重组正确且无编码两种重组酶质粒的tPAm-RPCI23-440C1 BAC克隆.
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