作者：师明磊; 胡显文; 陈惠鹏; 高丽华; 李世崇嵌合抗体活性检测阳性克隆生物学活性重链可变区双表达载体cho细胞脂质体转染elisa相对分子量特异性结合初步鉴定基因重组设计合成igg1重链基因扩大培养层析纯化rna阳离子表达量
摘要：表达了基因重组抗CD20嵌合抗体并对其生物学活性进行了初步鉴定.设计合成轻、重链可变区序列;提取血液RNA,通过RT-PCR得到人κ、IgG1的轻、重链恒定区序列.运用重叠延伸PCR,连接可变区与恒定区,将轻、重链基因连接至pIRES双表达载体.将质粒以阳离子脂质体转染CHO细胞,ELISA挑选阳性克隆,共获得7株表达较高的克隆,表达量约为2mg/L.扩大培养阳性克隆anti-CD20-1B3,收获上清,以蛋白A进行亲和层析纯化表达蛋白.SDS-PAGE检测表明纯化纯度达到95%,蛋白相对分子量与理论值吻合.以CD20+细胞Raji、Daudi、Ramous检测,表明该抗体能与CD20抗原特异性结合,体外杀伤试验说明抗体能够杀伤CD20+淋巴瘤细胞.
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
