作者：金宁一; 秦晓冰; 郑敏; 鲁会军; 张洪勇; ...猪2型圆环病毒核酸疫苗免疫研究血清抗体效价淋巴细胞亚类体液免疫反应elisa方法接种真核表达载体流式细胞仪统计学分析目的基因蛋白基因衣壳蛋白重组质粒免疫小鼠数量测定免疫实验细胞免疫
摘要：为了筛选得到较理想的核酸疫苗,用pVAX1真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙株的衣壳蛋白和与复制相关蛋白基因为目的基因,构建了4个重组质粒,分别是pVAX1-ORF2、pVAX1-IL18ORF2、pVAX1-ORF2ORF1和pVAX1-IL18ORF2ORF1.用它们免疫6～8周龄Balb/c小鼠,进小鼠后一周首免,每隔19d免1次,共免3次;每10d采血1次,三免后10d杀鼠取脾.用ELISA方法检测小鼠血清抗体效价,流式细胞仪检测脾T淋巴细胞亚类CD4+、CD8+数量.统计学分析发现:4个核酸疫苗实验免疫组均是从最后一次采集的小鼠血清中,获得最高的抗体效价,与对照组PBS和空载体pVAX1相比都能产生一定的体液免疫反应,且以pVAX1-IL18ORF2ORF1核酸疫苗免疫小鼠产生的血清抗体效价最高;脾T淋巴细胞亚类数量测定发现,免疫实验组的CD4+与CD8+的T细胞亚类总数显著高于对照组(P＜0.05),并以pVAX1-IL18ORF2ORF1数值较高.结论是核酸疫苗pVAX1-IL18ORF2ORF1既能较好地刺激细胞免疫又能产生一定的体液免疫反应,相对较好,将作为候选核酸疫苗进行下一步本体动物免疫实验研究.
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