作者：刘喜朋; 裴冬丽; 刘建华rnase融合蛋白链亲和素pet系统分子生物学表达载体大肠杆菌亲和纯化切割效率测定体系结合活性应用价值rna商品化活性相核酸酶重组复性电泳底物质粒
摘要：在大肠杆菌中用pET28a表达载体表达重组RNase A.变性条件下,利用His-Resin亲和纯化,得到60mg/L电泳纯的RNase A.纯化的RNase A复性后,利用含大量RNA分子的碱法抽提质粒为底物,测定重组RNase A活性,与商品化的RNase A活性相当.同时在RNase A活性测定体系中加入4 mol/L尿素会使RNA分子切割效率提高10倍左右.在此基础上,成功表达RNase A与链亲和素(streptavidin)的融合蛋白,经纯化复性后,该融合蛋白同时具有核酸酶、biotin结合活性,在分子生物学中具有重要的应用价值.
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